质谱参考测量程序：IVD试剂量值溯源的关键技术
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在体外诊断（IVD）领域，量值溯源是确保检测结果准确性和可靠性的关键环节，而参考测量程序则是量值溯源的核心手段。液相串联质谱技术凭借其高灵敏度、高特异性和广泛的线性范围等卓越性能，已成为参考测量程序的重要支撑，在 IVD 试剂的量值溯源工作中发挥着不可或缺的作用，并展现出独特的优势。
然而，质谱参考测量程序与传统的临床检验质谱方法在技术原理、操作流程、质量控制、结果解读等方面存在显著差异。深入理解这些差异对于正确应用质谱技术进行量值溯源至关重要。
基于此，本文对质谱参考测量程序的常规技术路线进行了汇总，包括样品制备、上机检测和数据处理，力求构建一个清晰、完整的质谱参考测量程序操作框架。同时，本文还对经典的质谱参考测量程序的技术参数进行了汇总，旨在为实践工作者提供参考，助力 IVD 试剂量值溯源工作的规范化与标准化发展，推动体外诊断行业的高质量发展。
质谱参考测量程序的一般技术路线
经典的质谱参考测量程序通过以下五个步骤实现：
称量样本及同位素内标：确保样本量起点可溯源到国家质量基准。
液液萃取 / SPE：把基质效应压到最低，争取获得 90% 以上的绝对回收率。
色谱完全分离：排除结构类似物的干扰；结构化进样，降低质谱信号不精密度带来的不确定度。
包括法定值：有效降低线性误差。
不确定度评定：按 GUM 拆分分量，充分评估不确定度。
图1 质谱参考测量程序一般技术路线
典型质谱参考测量程序的参数设置及性能
表1汇总了维生素（25羟基维生素D3，五甲基四氢叶酸）、激素（孕酮，睾酮）、药物（环孢素A，依维莫司，西罗莫司，他克莫司）的参考测量程序的方法参数和性能。可以看到，为了实现更优的分离效果，参考测量程序通常使用长色谱柱，分析时间通常在10分钟以上，部分方法甚至可达40分钟。前处理方法通常结合多种技术手段，或单一技术手段重复2次或以上，以获得更高的绝对提取回收率。因此，参考测量程序能够获得较小的不确定度，表1中不确定度均在10%以内，其中NIST 于2010年发布的25羟基维生素D3参考测量程序不确定度最小，仅为2.0%-2.1%。参考测量程序的低不确定度特性，是实现IVD试剂量值溯源的关键所在。
表1 典型质谱参考测量程序技术参数汇总
关于英盛生物
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公司以满足临床需求为己任，在国内最先推出了基于液相色谱-串联质谱平台的维生素14项测定试剂盒，是我国临床质谱的开拓者，是多平台合纵连横布局临床质谱的领航者，目前已覆盖四大质谱技术平台，LC-MS/MS、ICP-MS、核酸质谱和高分辨质谱，且已获得II/III类注册证近50余项，质谱试剂CE注册证近40项。
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供稿：英盛生物研发中心
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